RFLP og DNA-analyse applikasjoner

Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) er en molekylær metode for genetisk analyse som gjør det mulig å identifisere individer basert på unike mønstre av restriksjonsenzym kutte i spesifikke regioner av DNA.

Også kalt RFLP-analyse, tar teknikken fordel av polymorfismer i individers genetiske koder. Selv om alle medlemmer av en art i hovedsak har samme genetiske sammensetning, utgjør disse små forskjellene variasjoner i fenotype, for eksempel utseende eller metabolisme, mellom individer.

RFLP-analyseteknikk innebærer å kutte en bestemt region i DNA med kjent variabilitet, med restriksjonsenzymer, deretter separering av DNA-fragmentene ved agarosegelelektroforese og bestemmelse av antall fragmenter og relative størrelser.

Et restriksjonsenzym er et enzym, et proteinmolekyl, som kutter DNA på restriksjonssteder. I hovedsak blir DNA-prøven brutt opp og fordøyd av restriksjonsenzymene. De resulterende fragmentene blir separert i henhold til deres lengder, og mønsteret med fragmentstørrelser vil variere for hvert testet individ.

Den komplette RFLP-prosessen krever sondemerking, DNA-fragmentering, elektroforese, blotting, hybridisering, vasking og autoradiografi. Det påviste RFLP blir visualisert ved bruk av røntgenfilm i autoradiografi, der DNA-fragmenter kan sees og analyseres etter at de er skilt fra hverandre ved hjelp av elektroforese.

Noen av applikasjonene for RFLP-analyse inkluderer:

• DNA fingeravtrykk: Kriminaltekniske forskere kan bruke RFLP-analyse for å identifisere mistenkte basert på bevisprøver samlet inn ved forbrytelsesscener.
• Farskap: RFLP brukes også til bestemmelse av farskap eller for å spore aner.
• Genetisk mangfold: Teknikken kan brukes til å studere evolusjon og migrasjon av dyreliv, studere avlsmønstre i dyrepopulasjoner og påvisning og diagnose av visse sykdommer.

Teknikken for å bruke RFLP-påvisning av variasjon i genom er et viktig verktøy i genomkartlegging og analyse av genetisk sykdom. Hvis lokaliteten til et bestemt sykdomsgen blir søkt i et visst kromosom, ville forskere gjort det analysere DNA fra medlemmer av en familie med sykdommen, og se etter lignende arvemønstre i RFLP alleler.

Når et sykdomsgen er lokalisert, kan det å utføre RFLP-analyse på andre familiemedlemmer avsløre en bærer av mutantgenene eller signalisere total sykdomsrisiko. Det er viktig å merke seg at RFLP-teknikken ikke blir brukt mye nå som nyere og mer robuste teknikker brukes til DNA-analyse innen rettsvitenskap og flere andre felt.

Dessverre er RFLP-analyseteknikken kjedelig og treg. Bortsett fra å kreve en stor mengde DNA-prøve - vil prøven vanligvis trenge å være på størrelse med et kvarter, det vil si relativt stor for DNA-prøver - prosessen, fra sonemerking til vasking og autoradiografi, kan ta opptil en hel måned til fullstendig.

Resultatene fra Human Genome Project har ganske mye erstattet behovet for RFLP. Prosjektet tillot å bestemme hele sekvensen av DNA som finnes i humane celler, det menneskelige genom, og for å identifisere alle genene i det humane genomet.