Fosfatbuffert saltoppløsning eller PBS-løsning

PBS eller fosfatbufret saltvann er en bufferløsning det er spesielt verdifullt fordi det etterligner ionekonsentrasjonen, osmolariteten og pH i menneskekroppsvæsker. Med andre ord, det er isoton for menneskelige løsninger, så det er mindre sannsynlig at det forårsaker celleskader, toksisitet eller uønsket nedbør i biologisk, medisinsk eller biokjemisk forskning.

Det er flere oppskrifter for å tilberede PBS-løsning. Den essensielle løsningen inneholder vann, natriumhydrogenfosfat og natriumklorid. Noen preparater inneholder kaliumklorid og kaliumdihydrogenfosfat. EDTA kan også tilsettes i cellulær preparat for å forhindre klumping.

Fosfatbufret saltvann er ikke ideelt til bruk i løsninger som inneholder toverdige kationer (Fe²⁺, Zn²⁺) fordi nedbør kan forekomme. Noen PBS-løsninger inneholder imidlertid kalsium eller magnesium. Husk at fosfat kan hemme enzymatiske reaksjoner. Vær spesielt oppmerksom på denne potensielle ulempen når du jobber med DNA. Mens PBS er utmerket for fysiologisk vitenskap, må du være oppmerksom på at fosfat i en PBS-bufret prøve kan felle ut hvis prøven er blandet med etanol.

En typisk kjemisk sammensetning av 1X PBS har en sluttkonsentrasjon på 10 mM PO₄³⁻137 mM NaCl og 2,7 mM KCl. Her er den endelige konsentrasjonen av reagenser i løsningen:

Avhengig av formålet ditt, kan du forberede 1X, 5X eller 10X PBS. Mange kjøper ganske enkelt PBS-buffertabletter, løser dem opp i destillert vann og justerer pH etter behov med saltsyre eller natriumhydroksyd. Imidlertid er det enkelt å lage løsningen fra bunnen av. Her er oppskrifter på 1X og 10X fosfatbuffret saltvann:

1. Løs reagenssaltene i 800 ml destillert vann.
2. Juster pH til ønsket nivå med saltsyre. Vanligvis er dette 7,4 eller 7,2. Bruk en pH-måler for å måle pH, ikke pH-papir eller annen upresis teknikk.
3. Tilsett destillert vann for å oppnå et sluttvolum på 1 liter.

Sterilisering er ikke nødvendig for noen bruksområder, men hvis du steriliserer den, fordel løsningen i alikvoter og autoklaver i 20 minutter ved 1,05 kg / cm²) eller bruk filtersterilisering.

Fosfatbuffert saltvann kan være lagres ved romtemperatur. Det kan også være nedkjølt, men 5X og 10X løsning kan det bunnfall når det er avkjølt. Hvis du må avkjøle en konsentrert løsning, må du først oppbevare den ved romtemperatur til du er sikker på at saltene har løst seg helt opp. Hvis det oppstår nedbør, vil varmen av temperaturen bringe dem tilbake i løsning. Holdbarhet for kjøleskap er 1 måned.

10X er en konsentrert eller stamopløsning, som kan fortynnes for å lage en 1X eller normal løsning. En 5X løsning må fortynnes 5 ganger for å lage en normal fortynning, mens en 10X løsning må fortynnes 10 ganger.

For å fremstille en 1 liters arbeidsoppløsning av 1X PBS fra en 10X PBS-løsning, tilsett 100 ml av 10X-løsningen til 900 ml vann. Dette endrer bare konsentrasjonen av løsningen, ikke gram eller molar mengde av reagensene. PH-verdien skal ikke påvirkes.

En annen populær bufferløsning er Dulbeccos fosfatbufrede saltvann eller DPBS. DPBS, som PBS, brukes til biologisk forskning og buffere i pH-området 7,2 til 7,6. Den kan lagres i romtemperatur. Dulbeccos løsning inneholder en lavere konsentrasjon av fosfat. Det er 8,1 mM mM fosfationer, mens vanlige PBS er 10 mM fosfat. Oppskriften på 1x DPBS er:

Løs opp saltene i 800 ml vann. Juster pH til 7,2 til 76 ved bruk av saltsyre. Juster det endelige volumet til 1000 ml med vann. Autoklaver ved 121 ° C i 20 minutter.

• Dulbecco, R.; et al. (1954). "Plakkdannelse og isolering av rene linjer med poliomyelittvirus". J. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
• "Fosfatbuffret saltløsning (PBS." Cold Spring Harbor Protocols (2006). Cold Spring Harbor Laboratory Press.