Hvordan lage fosfatbuffert saltoppløsning (PBS)

Fosfatbufret saltoppløsning (PBS) er en bufferløsning som ofte brukes til immunhistokjemisk farging (IHC), og det brukes ofte i biologisk forskning. PBS er en vannbasert saltløsning som inneholder natriumhydrogenfosfat, natriumklorid og i noen tilfeller kaliumklorid og kaliumdihydrogenfosfat.

Immunhistokjemi refererer til prosessen med å påvise antigener som proteiner i cellene til a vevssnitt ved å bruke prinsippet om antistoffer som binder spesifikt til antigener i biologisk vev. Immunfluorescerende farging var den første immunhistokjemiske fargemetoden.

Antigener blir synlige når de er konjugert med antistoffer som bruker fluorescensfargestoffer på grunn av en antigen-antistoff-bindingsreaksjon. Denne prosessen skjer når den aktiveres av spennende lys med en spesifikk bølgelengde under et lysstoffmikroskop.

Osmolariteten og ionekonsentrasjonen av løsningene stemmer overens med menneskekroppen - de er isotiske.

Du kan forberede PBS på flere måter. Det er flere formler. Noen av dem inneholder ikke kalium, mens andre inneholder kalsium eller

Denne oppskriften er relativt enkel. Den er til 10X PBS aksjeløsning (0.1M). Du kan imidlertid også lage en 1X lagerløsning, eller begynne med denne 10X-oppskriften og fortynne den til 1X. Hele prosessen tar omtrent 10 minutter, og det er også mulig å legge til Tween.

• Monobasisk (vannfri) natriumfosfat
• Dibasisk natriumfosfat (vannfri)
• Natriumklorid
• Skaler og veier båter
• Magnetisk rører og rørstang
• En pH-sonde som er kalibrert og passende løsninger for justering av pH
• 1L volumetrisk kolbe
• Mellom 20 (valgfritt)

1. Vei 10,9 g vannfri natriumfosfat dibasisk (Na2HPO4), 3,2 g vannfri natriumfosfat monobasisk (NaH2PO4) og 90 g natriumklorid (NaCl). Løs opp i snaut 1 liter destillert vann.
2. Juster pH til 7,4 og oppløsningen til et sluttvolum på 1 liter.
3. Fortynn 10X før bruk og juster om nødvendig pH.
4. Du kan lage en PBS-løsning som inneholder 0,5 prosent Tween 20 ved å tilsette 5 ml Tween 20 til 1L-løsningen.

Oppbevar bufferen ved romtemperatur etter at du har laget PBS-løsningen.

Ikke-vannfrie reagenser kan erstattes, men du må beregne den aktuelle massen på nytt for å imøtekomme de tilsatte vannmolekylene.

Fosfatbufret saltvann har mange bruksområder fordi det er isotonisk og ikke-giftig for de fleste celler. Det kan brukes til å fortynne stoffer, og det brukes ofte til å skylle celler med celler. PBS kan brukes som et fortynningsmiddel i forskjellige metoder for å tørke biomolekyler fordi vannmolekylene i det vil være strukturert rundt stoffet - for eksempel protein. Det vil bli "tørket" og immobilisert til en solid overflate.

PH forblir jevn og konsistent for å forhindre ødeleggelse av celler.

Den tynne filmen med vann som binder seg til stoffet forhindrer denaturering eller andre konformasjonsendringer. Karbonatbuffere kan brukes til samme formål, men med mindre effektivitet.

PBS kan også brukes til å ta et referansespektrum når du måler protein adsorpsjon i ellipsometri.