Hvordan lage Tris-bufferløsning for medisinsk bruk eller laboratoriebruk

Bufferløsninger er vannbaserte væsker som inkluderer både en svak syre og dens konjugatbase. På grunn av kjemien deres, kan bufferløsninger holde pH (surhet) på et nesten konstant nivå selv når kjemiske forandringer skjer. Buffersystemer forekommer i naturen, men de er også ekstremt nyttige i kjemi.

I organiske systemer holder naturlige bufferløsninger pH på et konsistent nivå, noe som gjør det mulig for biokjemiske reaksjoner å skje uten å skade organismen. Når biologer studerer biologiske prosesser, må de opprettholde den samme konsistente pH; for å gjøre det, brukte de forberedte bufferløsninger. Bufferløsninger ble først beskrevet i 1966; mange av de samme bufferne brukes i dag.

For å være nyttig, må biologiske buffere oppfylle flere kriterier. Spesielt bør de være vannløselige, men ikke oppløselige i organiske løsningsmidler. De skal ikke kunne passere gjennom cellemembraner. I tillegg må de være ikke-giftige, inerte og stabile gjennom alle eksperimenter de brukes til.

Bufferløsninger forekommer naturlig i blodplasma, og det er grunnen til at blodet opprettholder en jevn pH mellom 7,35 og 7,45. Bufferløsninger brukes også i:

• gjæringsprosesser
• døende stoffer
• kjemisk analyse
• kalibrering av pH-målere
• DNA-ekstraksjon

Tris er forkortelse for tris (hydroksymetyl) aminometan, en kjemisk forbindelse som ofte brukes i saltvann fordi den er isoton og ikke-giftig. Fordi den har en Tris har en pKa på 8,1 og et pH-nivå mellom 7 og 9, blir Tris-bufferløsninger også ofte brukt i en rekke kjemiske analyser og prosedyrer inkludert DNA-ekstraksjon. Det er viktig å vite at pH i trisbufferløsningen endrer seg med temperaturen på løsningen.

Det er lett å finne kommersielt tilgjengelig trisbufferløsning, men det er mulig å lage den selv med riktig utstyr.

materialer:

Beregn mengden av hvert element du trenger, basert på den molære konsentrasjonen av løsningen du ønsker og mengden buffer du trenger.

• tris (hydroksymetyl) aminometan
• destillert avionisert vann
• HCl

Fremgangsmåte:

1. Begynn med å bestemme hvilken konsentrasjon (molariteten) og volum av Tris-buffer du vil lage. For eksempel varierer Tris-bufferløsningen som brukes til saltvann fra 10 til 100 mM. Når du har bestemt deg for hva du lager, beregner du antall mol Tris som kreves ved å multiplisere den molære konsentrasjonen av bufferen med volumet av bufferen som blir laget. (mol Tris = mol / L x L)
2. Deretter bestemme hvor mange gram Tris dette er ved å multiplisere antall mol med molekylvekten til Tris (121,14 g / mol). gram Tris = (mol) x (121,14 g / mol)
3. Løs opp Tris i det destillerte avioniserte vannet, 1/3 til 1/2 av ønsket sluttvolum.
4. Bland inn HCl (f.eks. 1M HCl) til pH-meter gir deg ønsket pH for din Tris-bufferløsning.
5. Fortynn bufferen med vann for å oppnå ønsket endelig volum av løsning.

Når løsningen er blitt tilberedt, kan den lagres i flere måneder på et sterilt sted ved romtemperatur. Tris bufferløsnings lange holdbarhet er mulig fordi løsningen ikke inneholder proteiner.