Natriumcitratbuffer brukes ofte til RNA-isolasjon, fordi den minimerer basehydrolyse av RNA-strengene, noe som gjør den uvurderlig for mRNA-rensing under genomisk forskning, og for å studere transkripsjon. Citratbaserte buffere hjelper også påvisning av antigener i faste vevspreparater, fordi de bryter tverrbindelsene dannet mellom antigenene og fikseringsmediene.
Med følgende enkle trinn kan man lage en natriumcitratbuffer med en pH på 6 (sur) på under 10 minutter.
Materialer til natriumcitratbufferen
Få materialer er nødvendige for å lage natriumcitratbufferen. Med sitronsyre trenger man bare 1 M natriumhydroksyd, destillert vann og en kalibrert pH-sonde. Natriumcitrat er valgfritt.
Å lage bufferen krever også en 1-liters gradert sylinder, en 1-liters volumekolbe og tre 1-liters medieflasker. Til slutt trenger du en magnetisk rørejern og en magnetisk rører. Alt dette materialet finnes på skolen, laboratorier på arbeidsstedet eller kjøpes på nettet eller i spesialbutikkene.
To alternativer for å lage bufferen
Det er to metoder for å lage natriumcitratbuffere, avhengig av materialene som er tilgjengelige for deg.
- Hvis du har både sitronsyre og konjugatbasen, lager du en stamoppløsning av hver ved å blande 21 gram sitronsyre i 1 liter destillert vann, og 29,4 gram natriumcitrat i 1 liter destillert vann.
- Hvis du bare har sitronsyre for hånden, kan du blande 2,1 gram i litt under 1 liter destillert vann.
Blanding av sitronsyre og natriumcitratløsninger
Bland 82 ml sitronsyreoppløsningen med 18 ml natriumcitratoppløsningen. Til dette, tilsett nok destillert vann til å bringe blandingens volum til litt under 1 liter.
Justere pH
Under omrøring av løsningen med en magnetisk omrører, bruk 1 M natriumhydroksyd for å justere pH i blandingen til 6,0. Deretter, med en volumetrisk kolbe, tilsett mer destillert vann for å bringe det endelige totale volumet av løsningen opp på nøyaktig 1 liter.